اماده سازی محیط کشت

لینک دریافت فایل خرید پایین توضیحات

فرمت فایل word  قابل ویرایش پرینت

تعداد صفحات: 105

اماده سازی محیط کشت

3-1 ترکیبات محیط کشت

بطور اشکار محیط کشت غذایی عامل مهم کشت بافت سلول بشمار اید، البته هر کدام گونه درختی ازمایش فاکتوریل انها کلیه مواد شیمیایی محیط کشت طیف وسیعی غلظت متغیر باشند، انجام نگرفته است. انجام چنین تحقیقی امکاناتی بیش انچه اکثر ازمایشگاهها موجود نیاز باشد.

انچه طراحی محیط کشت بطور خاصی مشکل کند، اثرات متقابل بسیار پیچیده مواد شیمیایی مختلف یک محیط کشت غذایی مشخص باشد. بعنوان مثال کاربرد بعضی قندها ر محیط کشت سبب کمبود شود. پیچیده تر ا حالتی بیش حد نیاز وجود داشته باشد حالت نیاز بافت کلسیم کاهش خواهد یافت. دلیل وجود چنی اثر متقابلی، تعیین ترکیبات مطلوب محیط کشت طریق ازمایشهای فاکتوریل مشکل است. طرفی وضعیت درنظر گرفتن حقیقت اثرات متقابل بین بافت مواد غذایی تحت تاثیر شرایط محیطی قبیل شدت کیفیت نور، دوره نوری، درجه حرارت، اگار مایع بودن محیط کشت، PH، غیره قرار گیرند پیچید تر گردد. بعلاوه عکس العمل بافت تغیر وضعیت فیزیولوژیکی ریز نمونه بافتی واکشت شده فرق کند.

محیط کشت اولیه کشت بافت بکار رود محلول غذایی تغییر یافته کشت ابکشت گیاهان بود( محلول غذایی ناپ، ففر هوگلند- جورج شرینتگتن) مواد مخلوطی اسیدهای امینه، ویتامینها سایر ترکیبات الی اضافه شد. امروزه اکثر کشتهایی استفاده شوند نوع تغییر یافته محیط قدیمی هستند بررسی فهرستی مشتمل 260 محیط کشت بافت گیاهی تنها 39 محیط کشت دارای ترکیبات پایه بودند محیط کشت موراشی اسکوک (MS )بین سایر محیط کشت گیاهی بیشترین کاربرد دارد. میان محیط کشت ذکر شده توسط جرج شرینتگتن، 53 محیط کشت نظر فرمول عناصر پرمصرف مشابه محیط کشت MS بودند ولی قسمت دیگر تفاوت داشتند.

اکثر محیط کشت طریق ازمون خطا بتدریج بهبود یافته اند. البته برخی محیط کشت روش تجربی کمتر بکار رفته است. مقدار مواد معدنی موجود د محیط کشت MS براساس تجزیه خاکستر بافت توتون سوزانده شده باشد. محیط کشت LM اغلب سونی برگها استفاده شود براساس تجزیه ترکیب شیمیایی ارکگونهای بذر نابالغ Pseudostsuha menziesii البته هیچ گونه تضمینی وجود ندارد محیط کشت تمام ژئوتیپ مطلوب باشند اینکه چنین تجزیه شیمیایی تمام انواع بافتهای گونه مختلف انجام شده باشد. محیط کشت موردنیاز جهت رشد کالوس نسبت محیط کشت ایجاد رشد ساقه بایستی دارای مواد معدنی غلظت بیشتری باشد حالیکه محیط کشت موردنیاز جهت ایجاد رشد ریشه فرق کند محیط کشتی کشت پروتوپلاست بکار رود اغلب محیط کشتی پروتوپلاست استفاده شود بطور کامل تفاوت دارد. طرف دیگر گونه وجود دارد درطیف وسیعی محیط کشت بخوبی رشد کنند؛ یعنی محیط کشتهای مطلوب مشخصی اینها وجود ندارد. همچنین حالت جود دارند انها تهیه یک ژئوتیپ مناسب تهیه یک محیط کشت مطلوب دقیق مهمتر است. چنین حالتی جنس Populus وجود دارد. بعضی ژئوتیپهای جنس محیطهای ازمایش شده خیلی ضعیف رشد کنند برخی گونه هر رقم دارای نیازهای غذایی مخصوص خود است.

جرج همکاران براساس مواد تشکیل دهنده، محیط کشت بافتهای گیاهی چهار دسته عمده، عناصر پرمصرف، عناصر کم مصرف، ویتامینها اسیدهای امینه امیدها تقسیم کرده اند. برخی محیط کشت مانند وایت، موراشی واسکوگ، گامبور همکاران(B5 ) لیتوی لوید مک کاون محیط کشت پایه تقریبا پایه هستند. بسیاری محیط کشتهای استفاده دیگر انهایی هستند اثر تغییر کلی جزئی محیط کشت پایه حاصل شده اند.

عناصر پرمصرف محیط کشت موراشی اسکوگ اغلب حد غلظت محیط پایه رقیق شوند همین ترتیب چنین کاری سایر محیط کشت غلظت عناصر انها بالاست انجام گیرد.

علاوه طبقه بندی محیط کشتهای ذکرشده بالا محیط کشتها توان دو حالت مایع جامد تقسیم کرد. حالت جامد محیط دارای عامل ژله کننده بافت کشت شده سطح محیط نگه دارد. محیط کشتها همچنین درای ویتامینها، اسیدهای امینه، تنظیم کننده رشد کربوهیدراتها اغلب سایز مواد تشکیل دهنده موردنیاز هست.

3-1-1 عوامل تولیدکننده ژل جایگزینی انها

3-1-1-1 اگار دیگر مواد تولید کننده ژل

اگار رایجترین عامل تولید ژل محیط کشت استفاده شود. اگار پلی ساکاریید پیچیده برخی گونه نوعی علف هرز دریایی بدست اید اگار طی مراحل ساخت جات متفاوتی خلوص طی میکند. ولی مقداری ناخالصیهای الی معدنی باقی ماند. دیفکوباکتواگار رایجترین اگار مصرفی کشت بافت دارای مقدار زیادی سدیم مس باشد. میزان سدیمی طریق اگار محیط کشت وارد شود براحتی توسط بافت اکثر گیاهان تحمل شود. اما گاهی اوقات مس محیط کشت ایجاد سمیت کند. محققان اغلب اگار غلظت بین 5/0 1 درصد بکار برند غلظت مناسب اگار هر نوع محیط کشت ریز نمونه باید تعیین شود. غلظت خیلی بالای منجر تنش اب بافت شود غلظت کم یک لایه مایع سطح ژله تشکیل خواهد داد غرق شدن ریزنمونه لایه مایع مانع مبادلات گازی شده کاهش رشد منجر شود. بعلاوه کشت ریزنمونه محیط کشت مایع تواند باعث شیشه شدن کشتها شود علیرغم انچه بیان بعضی کتشها محیط غلظت کم اگار رشد بهتری دارند. بعنوان مثال ماده خشک نوک شاخه Picea obies در